淺看原代細胞分離的懸浮細胞分離方法

　　原代細胞分離是指將組織分散制成細胞懸液后從中獲取目的細胞的過程，獲得高純度、高活性的原代細胞則是很多細胞實驗成功的關(guān)鍵要素之一。

　　原代細胞是直接取自活組織(例如活組織檢查材料)的細胞，并建立用于體外生長。這些細胞經(jīng)歷了非常少的群體倍增，因此與連續(xù)(腫瘤或人工永生化)細胞系相比，它們更能代表它們所衍生組織的主要功能成分，使得原代細胞成為更具代表性的體內(nèi)模型。

　　所以，自己動手分離原代細胞，是非常有必要的。

　　原代細胞分離方法有許多種：懸浮離心法、直接組織塊法、酶消化法、非酶消化法、機械分散法等，今天，我們主要來看看常用的方法——酶消化法。

　　原代細胞分離的懸浮細胞的分離方法：

　　1、將血液、羊水、胸水或腹水等懸液直接轉(zhuǎn)至離心管中，1000rpm/分鐘離心5分鐘。

　　2、去掉上清，離心沉淀用無鈣、鎂的PBS清洗后1000rpm/分鐘離心5分鐘。此步重復(fù)兩次。

　　3、用培養(yǎng)基重懸，調(diào)整適當細胞濃度后分瓶培養(yǎng)。

　　4、如選用懸液中某種細胞，可采用離心后的細胞分層液收獲目的細胞。

　　重點注意事項：

　　1、使用細胞分離酶時，請注意溫度和濕度條件。如蛋白水解酶可以自動分解，因此建議在使用前立即將其溶解，并在冰上保存2°C～8°C。

　　2、通常用于細胞分離的大多數(shù)酶可以直接溶解于平衡鹽溶液或所選緩沖液中。對于許多細胞分離中，確保解離期間的組織存活，需要孵育培養(yǎng)基充分氧化并在生理pH下緩沖。95%O2、5%CO2平衡的介質(zhì)來完成。