RNA-seq實(shí)驗(yàn)

簡(jiǎn)要描述：RNA-seq實(shí)驗(yàn)，也叫轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)，就是把mRNA,smallRNA,and NONcoding RNA等等，其中一些用高通量測(cè)序技術(shù)把它們的序列測(cè)出來(lái)，以此來(lái)檢測(cè)它們的表達(dá)水平。

更新時(shí)間：2024-05-06
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實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)

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RNA-seq實(shí)驗(yàn)原理及過(guò)程：

轉(zhuǎn)錄組是某個(gè)物種或者特定細(xì)胞類型產(chǎn)生的所有轉(zhuǎn)錄本的集合。轉(zhuǎn)錄組研究能夠從整體水平研究基因功能以及基因結(jié)構(gòu)，揭示特定生物學(xué)過(guò)程以及**發(fā)生過(guò)程中的分子機(jī)理。

先將樣品提取總RNA，在這之后，除去rRNA（對(duì)于真核生物，用帶有Oligo(dT)的磁珠富集mRNA，對(duì)于原核生物，用試劑盒去除rRNA），向得到的mRNA中加入Fragmentation Buffer使其片斷成為短片段，再以片斷后的mRNA為模板，用六堿基隨機(jī)引物(random hexamers)合成cDNA**鏈，并加入緩沖液、dNTPs、RNase H 和DNA polymerase I 合成cDNA第二鏈，經(jīng)過(guò)QiaQuick PCR試劑盒純化并加 EB緩沖液洗脫經(jīng)末端修復(fù)、加堿基A，加測(cè)序接頭，再經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳回收目的大小片段，并進(jìn)行PCR擴(kuò)增，從而完成整個(gè)文庫(kù)制備工作，構(gòu)建好的文庫(kù)用Illumina HiSeq2000進(jìn)行測(cè)序。

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