簡要描述:人為地在融合的單層細胞上制造一個空白區(qū)域,邊緣的細胞會逐漸進入空白區(qū)域使“劃痕"愈合,又名傷口愈合實驗(Wound-Healing Assay)細胞劃痕實驗是目前測定細胞遷移運動與修復能力的zcy也是zjd的方法,科研中常常用來觀察某外源因素對細胞遷移影響。
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實驗步驟
標記六孔板
用marker筆在六孔板底部畫平行線,平行線之間的距離0.5cm,為了保證后續(xù)拍照位置是相同的;
鋪板
細胞重懸鋪板,密度控制在第二天長滿,若過夜后細胞wq長滿,也可以適當延長培養(yǎng)時間,但如果細胞密度已經(jīng)很大,盡量重新鋪板,因為可能過一天后細胞太滿,會導致細胞狀態(tài)逐漸變差,后續(xù)細胞可能不遷移而是凋亡;
制造劃痕
第二天用直尺比著使用10ul槍頭制造劃痕,劃痕方向與標志線垂直,最好保持力度一致,盡量一次性劃完,然后PBS沖洗3次,洗去漂浮的細胞
為了減少細胞增殖所引起的假陽性結果,降低細胞增殖對實驗結果的影響,將wq培養(yǎng)基換成無血清培養(yǎng)基和低血清培養(yǎng)基(FBS<2%繼續(xù)培養(yǎng)細胞);
拍照
拍照前最好用PBS沖洗3次,一般認為24h為細胞的一個周期,所以檢測時間最好不要超過一個周期的時間,按照6孔板背后畫線的垂直方向劃痕
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