簡要描述:銀染法是一種用于檢測蛋白質(zhì)或核酸的生物化學(xué)技術(shù),其基本原理涉及銀離子的化學(xué)反應(yīng)。
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銀染法是一種用于檢測蛋白質(zhì)或核酸的生物化學(xué)技術(shù),其基本原理涉及銀離子的化學(xué)反應(yīng)。以下是銀染法原理的詳細介紹:
· 銀染法中,銀離子與DNA或蛋白質(zhì)結(jié)合。
· 在堿性pH環(huán)境下,還原劑如甲醛將銀離子還原成金屬銀,這些銀顆粒沉淀在蛋白質(zhì)或DNA的表面上,從而顯色。
· 由于銀染具有很高的靈敏度,它能夠檢測到凝膠上低于1ng/蛋白質(zhì)點的物質(zhì),因此廣泛應(yīng)用于2D凝膠分析和極低蛋白含量的測定中。
此外,銀染中的蛋白質(zhì)吸光度與濃度之間的關(guān)系可用于研究蛋白質(zhì)的某些特殊基團,如含硫氨基酸在銀染中的作用表明,不含或只含少量gas殘基的蛋白質(zhì)有時會呈現(xiàn)負(fù)染。
銀染法實驗步驟如下:
1. 固定:將凝膠放入約100ml固定液中,室溫?fù)u動20分鐘或40分鐘以上甚至過夜。
2. 洗滌:棄去固定液,加入100ml 30%乙醇或100ml 10%甲醇,室溫?fù)u動10分鐘。
3. 增敏:加入100ml銀染增敏液(1X)或100ml銀溶液(1X),室溫?fù)u動2分鐘。
4. 洗滌:棄去增敏液,加入200ml MilliQ級純水或雙蒸水,室溫?fù)u動10分鐘。
5. 顯色:加入100ml銀溶液(1X)或顯色液,室溫?fù)u動10分鐘。
6. 洗滌:棄去顯色液,加入200ml MilliQ級純水或雙蒸水,室溫?fù)u動1-1.5分鐘。
7. 顯影:根據(jù)顯色結(jié)果,使用顯影液進行顯影,直至看到目的蛋白帶
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