簡要描述:大鼠動物髓核細(xì)胞的原代培養(yǎng)原代細(xì)胞(primary cell):是指從機(jī)體的組織(如人組織、小鼠組織、大鼠組織和兔組織等)經(jīng)蛋白酶或其它的方法獲得單個細(xì)胞并在體外進(jìn)行模擬機(jī)體培養(yǎng)的細(xì)胞,稱為原代細(xì)胞。
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大鼠動物髓核細(xì)胞的原代培養(yǎng)方法
頸椎脫臼法處死SD大鼠。
剃去背毛,75%酒精浸泡5min。
從尾椎處剪開皮膚,取出腰椎。
盡量剔除附著的肌肉,用含2%雙抗的PBS沖洗3-5次。
分離椎節(jié),切開纖維環(huán)分離凝膠狀髓核,將凝膠狀髓核置于PBS中沖洗 3 次,去除血跡,剪碎髓核組織呈 1mm3大小,移至離心管后加入5倍體積的1.5%Ⅱ型膠原酶,37℃搖床消化2h。
消化結(jié)束 ,20%FBS終止消化,100um濾網(wǎng)過濾,1000r/min 離心 5min,棄上清后DMEM/F12 重懸,按 1×105/ml接種于培養(yǎng)板,加入含1%雙抗和 15% FBS 的 DMEM/F12,置于37 ℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4 d后換液,以后每3天換 液 1 次,細(xì)胞達(dá) 90% 融合后傳代。
大鼠動物髓核細(xì)胞的原代培養(yǎng)評價
原代細(xì)胞(primary cell):是指從機(jī)體的組織(如人組織、小鼠組織、大鼠組織和兔組織等)經(jīng)蛋白酶或其它的方法獲得單個細(xì)胞并在體外進(jìn)行模擬機(jī)體培養(yǎng)的細(xì)胞,稱為原代細(xì)胞。
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