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免疫熒光染色服務(wù)

簡要描述:免疫熒光染色服務(wù):免疫熒光又稱免疫熒光抗體。免疫熒光實驗原理是將熒光素標記在相應(yīng)的抗體上,直接與相應(yīng)抗原反應(yīng)。其優(yōu)點是方法簡便、特異性高,非特異性熒光染色少,相對使用標記抗體用量偏大。利用抗原抗體反應(yīng)進行組織或細胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位。

  • 更新時間:2023-10-30
  • 廠商性質(zhì):代理商
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免疫熒光染色服務(wù)一、制片

選無自發(fā)性熒光的石英玻片或普通優(yōu)質(zhì)玻片,洗凈后浸泡于無水乙醇和乙.氧.基.乙.烷等量混合液中。用時取出用綢布擦凈。將待檢樣品如組織塊剪成適當大小印壓于玻片上。也可采用冰凍切片或石蠟切片樣品。

免疫熒光染色服務(wù)二、固定

除研究細胞表面抗原或不穩(wěn)定抗原可不固定外,一般均應(yīng)固定。

三、水洗

固定后以冷的0.01 Mol/L pH7.4PBS液浸泡沖洗,最后以蒸餾水沖洗,防止自發(fā)性熒光。

四、染色

染色分直接染色法與間接染色法。

1. 材料與試劑

(1)熒光抗體,稀釋至應(yīng)用濃度。

(2)0.01 Mol/LpH7.4PBS液

(3)9份優(yōu)質(zhì)甘油加1份pH7.4PBS液即為甘油緩沖液。甘油有減少非特異性熒光的作用。

(4)帶蓋方盤

2.直接染色法

(1)將固定好的玻片置于濕盤中,滴加熒光抗體染色液,以覆蓋為度,加蓋,37℃感做30min~45min,

(2)PBS沖洗3次,每次沖洗3 min,即3x3沖洗。

(3)蒸餾水沖洗。

(4)滴甘油緩沖液一滴,封片,熒光顯微鏡檢查。

3. 間接染色法

(1)檢查抗原:

①取固定標本,加已知的免疫血清,37℃孵育30 min。

②以PBS液3x3沖洗。

③再加熒光標記的抗抗體,37℃孵育30 min。

④PBS 3x3沖洗。

⑤H2O沖洗,涼干。

⑥加甘油緩沖液,封片、鏡檢。

(2)檢查抗體:

①免疫后動物的淋巴組織涂片,自然干燥,甲醇固定。

②滴加相應(yīng)抗原液(按1:100~1:500稀釋),37℃孵育30 min。

③PBS液3x3沖洗。

④加熒光抗體,37℃孵育30 min。

⑤PBS液3x3沖洗。

⑥水洗,涼干。

⑦加甘油緩沖液,封片、鏡檢。



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