簡(jiǎn)要描述:平板克隆形成技術(shù)服務(wù)當(dāng)單個(gè)細(xì)胞在體外增殖6代以上,其后代所組成的細(xì)胞群體,稱為集落或克隆。每個(gè)克隆含有50以上的細(xì)胞,大小在0.3-1.0mm之間。集落形成率表示細(xì)胞的獨(dú)立生存能力,各種理化因素可能導(dǎo)致細(xì)胞的克隆形成能力發(fā)生改變,通過(guò)計(jì)數(shù)克隆形成率可對(duì)單個(gè)細(xì)胞的增殖潛力做定量分析,了解細(xì)胞的增殖能力和獨(dú)立生存能力。
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平板克隆形成技術(shù)服務(wù)基本步驟:
1.取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的各組細(xì)胞,分別用0.25%****消化并吹打成單個(gè)細(xì)胞并把細(xì)胞縣浮在10%胎生血清的DMEM培養(yǎng)液中衡用。
2.將細(xì)胞具酒作梯度倍數(shù)稀釋,每組細(xì)胞分別以每川50、100,200個(gè)細(xì)胞的梯度密度分別接種合10mL 37"C預(yù)溫培養(yǎng)液的皿中,并輕輕轉(zhuǎn)動(dòng),使細(xì)胞分散均勻。置37C、5%COz及飽和溫度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2-3周。
3.經(jīng)常觀察,當(dāng)培養(yǎng)皿中出現(xiàn)肉眼可見的克隆時(shí),終止培養(yǎng)。棄去上清液,用PBS小心浸洗2次。加甲醛固定細(xì)胞5ml固定15分鐘。然后安固定液加適量GIMSA應(yīng)用染色液染10-30分鐘然后用流水緩慢洗去染色源,空氣干燥。
4.將平皿倒置并疊加一張帶網(wǎng)格的適明膠片,用肉眼直接計(jì)數(shù)克隆或在顯微鏡(低倍鏡)計(jì)數(shù)大于10個(gè)細(xì)胞的克隆數(shù),再計(jì)算克隆形成率,克隆形成率=克隆數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)。
平板克隆形成技術(shù)服務(wù)流程:
1)項(xiàng)目方案的確定,包括目的細(xì)胞、 細(xì)胞處理方式及處理時(shí)間等;
2)細(xì)胞培養(yǎng);
3)克隆形成實(shí)驗(yàn);
4)克隆形成實(shí)驗(yàn)圖片及實(shí)驗(yàn)報(bào)告。
我們擁有專業(yè)的實(shí)驗(yàn)室、精良的實(shí)驗(yàn)設(shè)備和經(jīng)驗(yàn)豐富的科研技術(shù)人員。技術(shù)團(tuán)隊(duì)包括研究員(博士后)2人,助理研究員(博士)4人,核心研究員(碩士)15人,主要致力于基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)、生物化學(xué)、病理檢測(cè)、基因檢測(cè)等技術(shù)在科研中的應(yīng)用與推廣。通過(guò)高度細(xì)分、較好的的服務(wù)平臺(tái),為廣大客戶提供了完善的技術(shù)解決方案和服務(wù)。目前,及,涉及臨床醫(yī)學(xué)、腫瘤生物學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)等生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)等諸多領(lǐng)域。
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