成骨細胞原代培養(yǎng)實驗

      成骨細胞的來源主要有骨、骨膜、骨髓及骨外組織。及人的胚胎顱骨或新生動物的顱骨為成骨細胞的常用來源。Robey(1985)采用膠原酶處理松質(zhì)骨骨塊以除去結(jié)締組織和骨髓造血組織，再將處理過的骨塊進行培養(yǎng)來獲得更純凈的成骨細胞。將人胚胎顱骨中所獲得的成纖維樣細胞通過加入β-甘油磷酸鈉誘導(dǎo)分化后培養(yǎng)3周，可見細胞基質(zhì)鈣化，表明所得細胞為具有很強分化能力的成骨細胞。將以乙二胺四乙酸和膠原酶消化胎兒顱骨獲得的細胞進行體外培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)其在人工材料上能持續(xù)增殖20倍以上，且具有高ALP活性。取人松質(zhì)骨建立成骨細胞體外培養(yǎng)模型并得到了大量純化的成骨細胞。選用成年雌性大鼠松質(zhì)骨在較短時間內(nèi)得到較多數(shù)量的成骨細胞。骨膜中的細胞早已被證實在適當(dāng)?shù)臈l件下可形成骨和軟骨。Vacanti等(1993)從新生小牛肩胛骨骨膜中分離出成骨細胞并種植到多孔聚羥乙酸支架上，7～10d后成骨細胞發(fā)生增殖。
用膠原酶短時預(yù)消化法從取自新西蘭兔脛骨上端內(nèi)側(cè)面骨膜上短時間內(nèi)得到高純度的成骨細胞。骨髓分造血和基質(zhì)兩大系統(tǒng)，其成骨能力來源于基質(zhì)。張銀剛等(2000)采用胎兔長管骨骨髓細胞進行體外培養(yǎng)，證明其有骨細胞系特性，可作為修復(fù)骨缺損的種子細胞。周皮細胞、血管內(nèi)皮細胞、成纖維細胞、成肌細胞都曾有過向成骨細胞轉(zhuǎn)化的報道。