動(dòng)物皮下成瘤實(shí)驗(yàn)

動(dòng)物皮下成瘤實(shí)驗(yàn)

動(dòng)物類型：裸鼠

造模試劑：腫瘤細(xì)胞或腫瘤組織塊

造模方法：一般是皮下注射成瘤（腋下或背部皮下 ）

接種細(xì)胞密度1*10^6~5*10^7cell/ml，接種0.1ml~0.2ml，就是將培養(yǎng)的細(xì)胞收集起來(lái)調(diào)整到適宜濃度重懸于不含血清的培養(yǎng)液或PBS中，放于冰盒中攜至動(dòng)物房，直接注射即可。

死亡率：10%，成功率：90%左右

動(dòng)物皮下成瘤實(shí)驗(yàn)技巧

1、細(xì)胞狀態(tài)是成瘤實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵，所以細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)一定要好，取處于對(duì)數(shù)生*的細(xì)胞，細(xì)胞達(dá)80-90%左右密度為宜;收集細(xì)胞前一天晚上更換新鮮培養(yǎng)基。
2、消化細(xì)胞后用預(yù)冷的PBS洗兩遍，目的為去除細(xì)胞中的血清。
3、用PBS或者無(wú)血清培養(yǎng)基吹打細(xì)胞沉淀至合適的濃度，一般皮下瘤接種的細(xì)胞量為1-5×10^6個(gè)細(xì)胞/支，接種體積為0.1ml，因此細(xì)胞懸液的濃度為1-5×10^7個(gè)細(xì)胞/ml。
4、細(xì)胞消化后應(yīng)盡快接種到裸鼠皮下，一般盡量在半小時(shí)內(nèi)完成，途中將細(xì)胞懸液放在冰上降低細(xì)胞的代謝。
5、選擇的裸鼠一般在5-8周齡，體重18-20g左右，種植部位選擇血供豐富區(qū)域，如腋窩中后部、腹股溝中上部。
6、接種前用槍將細(xì)胞懸液充分的吹散，防止細(xì)胞成團(tuán)而降低細(xì)胞成活率。
7、接種時(shí)，針頭在皮下進(jìn)針深一點(diǎn)，約1cm深，減少注射后細(xì)胞懸液從針眼溢出。
8、如何抓牢裸鼠?左手拇指和食指捏緊裸鼠頸背部皮膚，小拇指夾住裸鼠尾巴。